缺氧誘導(dǎo)小分子RNA調(diào)控腎癌侵襲轉(zhuǎn)移的分析與研究

總序
論叢前言
前言
第1章 GEO中腎透明細(xì)胞癌高通量測序數(shù)據(jù)庫的生物信息學(xué)分析
1．1 概述
1．2 疾病相關(guān)的基因芯片數(shù)據(jù)庫發(fā)掘臨床腫瘤新標(biāo)靶
第2章 人腎透明細(xì)胞癌中的miRNA表達(dá)譜芯片檢測及靶基因分析
2．1 材料與方法
2．1．1 實驗設(shè)備及主要儀器
2．1．2 主要實驗試劑及試劑盒
2．1．3 miRNA芯片實驗方法
2．2 miRNA芯片數(shù)據(jù)的分析方法
2．2．1 差異miRNA的篩選
2．2．2 基因功能的顯著性分析（G0-Analysis）
2．2．3 基因通路的顯著性分析（Pathway-Analysis）
2．3 結(jié)果
2．3．1 腎癌標(biāo)本臨床及病理資料
2．3．2 miRNA芯片實驗結(jié)果和熱圖分析
2．3．3 腎癌標(biāo)本中差異miRNAs的靶基因分析
2．3．4 腎癌標(biāo)本中差異靶基因的顯著性功能分析（GO Analysis）
2．3．5 腎癌標(biāo)本中差異基因的顯著性pathway分析和其調(diào)控網(wǎng)路分析
2．4 討論
2．5 結(jié)論
第3章 腎透明細(xì)胞癌組織中miR-646、相關(guān)基因檢測及其與腫瘤患者臨床相關(guān)因素分析
3．1 材料
3．1．1 臨床樣本
3．1．2 實驗用試劑
3．1．3 實驗用儀器
3．2 方法
3．2．1 miRNA熒光定量PCR操作流程
3．2．2 靶基因NOBl和SLC4Al檢測
3．2．3 靶基因NOBl和SLC4A1的蛋白表達(dá)水平檢測（Western blot）
3．2．4 免疫組織化學(xué)檢測NOBl蛋白表達(dá)
3．2．5 統(tǒng)計分析方法
3．3 結(jié)果
3．3．1 腎透明細(xì)胞癌中miR-646和NOBl的表達(dá)情況和單變量和多變量風(fēng)險模型分析
3．3．2 不同級別腎透明細(xì)胞癌中NOBl的表達(dá)情況及其與臨床病理特征的關(guān)系
3．4 討論
3．5 結(jié)論
第4章 miR-646靶基因驗證及其在腎透明細(xì)胞癌中的作用及機(jī)制研究
4．1 材料和儀器
4．1．1 細(xì)胞系及動物模型
4．1．2 細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)粒抽提相關(guān)試劑盒
4．1．3 實驗主要儀器
4．2 方法
4．2．1 靶基因雙熒光素酶活性檢測
4．2．2 轉(zhuǎn)染后腎癌細(xì)胞系和293T細(xì)胞中miR-646和相關(guān)因的表達(dá)水平檢測
4．2．3 轉(zhuǎn)染miR-646后腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞增殖影響的檢測（MTT法）
4．2．4 轉(zhuǎn)染miR-646后腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞遷移的檢測（Wound healing法）
4．2．5 轉(zhuǎn)染miR-646后腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞凋亡的檢測（FACS）
4．2．6 轉(zhuǎn)染miR-646后腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞侵襲的檢測（Transwell小室）
4．2．7 血管生成實驗（．Angiogenesis），體外條件下腎細(xì)胞癌細(xì)胞與HUVE（人臍帶血內(nèi)皮細(xì)胞）共培養(yǎng)檢測血管形成能力
4．2．8 蛋白質(zhì)芯片檢測miR-646對腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞的下游靶基因及通路的相關(guān)蛋白表達(dá)變化
4．2．9 小鼠成瘤實驗檢測miR-646和NOBl-shRNA對腎癌細(xì)胞裸鼠體內(nèi)成瘤性的影響
4．3 結(jié)果
4．3．1 786-0、ACHN和Caki-2腎癌細(xì)胞株中miR的表達(dá)水平
4．3．2 miR-646靶基因生物信息學(xué)預(yù)測
4．3．3 293-T細(xì)胞中miR-646靶向調(diào)控NOBl的雙熒光素酶活性的檢測
4．3．4 腎透明細(xì)胞癌中過表達(dá)或干擾miR-646后對靶基因NOBl基因和蛋白表達(dá)的影響
4．3．5 miR-646對腎癌細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期的影響
4．3．6 miR-646對腎癌細(xì)胞遷移和侵襲功能的影響
4．3．7 細(xì)胞克隆實驗檢測miR-646對腎癌細(xì)胞增殖生長的影響
4．3．8 體外血管生成實驗（Angiogenesis）檢測miR-646對腎癌細(xì)胞血管形成影響
4．3．9 體內(nèi)實驗進(jìn)一步驗證體外細(xì)胞功能實驗：miR-對腎癌細(xì)胞裸鼠成瘤性的影響
4．3．10 miR-646可直接靶向NOBl基因，間接影響SLC4A1基因的表達(dá)水平
4．3．11 miR-646靶向NOBl基因?qū)APK通路的調(diào)控機(jī)制
4．4 討論
4．5 小結(jié)
第5章 總結(jié)與展望
5．1 結(jié)論
5．2 進(jìn)一步工作的方向
參考文獻(xiàn)
后記
附錄綜述