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內(nèi)容簡(jiǎn)介

　　《基因工程實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》以基因克隆為主線，選編了35個(gè)實(shí)驗(yàn)，包含了從核酸與質(zhì)粒的提取、基因文庫構(gòu)建與篩選、基因分離方法的確定、PCR法獲得基因、克隆載體和表達(dá)載體的重組、重組子的鑒定，基因的表達(dá)到表達(dá)產(chǎn)物——蛋白的純化、鑒定等相關(guān)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)內(nèi)容。同一實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目提供了多種可供選擇的實(shí)驗(yàn)方法，并強(qiáng)調(diào)指出了實(shí)驗(yàn)中的注意事項(xiàng)，還對(duì)與實(shí)驗(yàn)相關(guān)的內(nèi)容進(jìn)行了評(píng)議。選編的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容銜接緊密，在實(shí)際教學(xué)時(shí)，可以針對(duì)不同層次、不同學(xué)時(shí)數(shù)的要求，既可以集中在兩個(gè)星期連續(xù)進(jìn)行，也可以分成十次實(shí)驗(yàn)階段性完成。為提高教學(xué)效率，作者還將實(shí)驗(yàn)安排分時(shí)段詳細(xì)列于實(shí)驗(yàn)計(jì)劃表中，便于教師組織實(shí)驗(yàn)教學(xué)。

作者簡(jiǎn)介

暫缺《基因工程實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》作者簡(jiǎn)介

圖書目錄

實(shí)驗(yàn)計(jì)劃表
導(dǎo)論
1 基因文庫的構(gòu)建
l—l 染色體DNA的提取
1—2 總RNA和mRNA的提取
1—3 噬菌體DNA的提取
l一4 染色體DNA的部分消化
1—5 基因組文庫的構(gòu)建
1—6 cDNA合成
1—7 cDNA文庫的構(gòu)建
2 目的基因的獲得
2—1 PCR擴(kuò)增及RT—PCR
2—2 核酸電泳
2—3 核酸探針的標(biāo)記及檢測(cè)
2—4 核酸探針篩選基因文庫
3 載體質(zhì)粒的制備
3—1 質(zhì)粒DNA的提取與純化
3—2 核酸純度、濃度與相對(duì)分子質(zhì)量的測(cè)定
4 擴(kuò)增質(zhì)粒的構(gòu)建
4—1 限制性內(nèi)切酶的酶切反應(yīng)
4—2 凝膠電泳法進(jìn)行DNA的分離、提純
4—3 DNA片段的體外連接
5 重組DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞
5—1 感受態(tài)細(xì)胞的制備
5—2 重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
6 重組子的篩選與鑒定
6—1 陽性克隆的篩選
6—2 測(cè)序與序列同源性分析
6—3 Southern印跡
7 表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與誘導(dǎo)表達(dá)
7—1 表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
7—2 Northern印跡
7—3 外源基因的誘導(dǎo)表達(dá)
7—4 SDS—PAGE
7—5 Western印跡
7—6 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)
7—7 蛋白質(zhì)生物功能測(cè)定法
8 工程菌的培養(yǎng)與目標(biāo)產(chǎn)物分離
8—1 發(fā)酵條件的優(yōu)化
8—2 誘導(dǎo)表達(dá)蛋白質(zhì)的分離沉淀
8—3 凝膠過濾層析
8—4 離子交換層析
8—5 蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定
8—6 酶活性的測(cè)定
8—7 分離純化蛋白的收率計(jì)算與保存
參考文獻(xiàn)
附錄1 簡(jiǎn)寫
附錄2 實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
附錄3 如何撰寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告
附錄4 常用的堿基、氨基酸符號(hào)及緩沖液
附錄5 大腸桿菌基因型
附錄6 培養(yǎng)基與試劑的配制
附錄7 實(shí)驗(yàn)儀器