生物化學與分子生物學實驗技術

第一章 生化實驗基本技術
第一節(jié) 分光光度法
一、紫外及可見分光光度法
二、熒光光譜分析法
第二節(jié) 層析法
一、紙層析法
二、薄層層析法
三、離子交換層析法
四、凝膠層析法
第三節(jié) 電泳法
一、電泳方法的分類
二、電泳技術的應用
第四節(jié) 離心分離法
一、原理與計算
二、制備離心技術
三、分析超離心
本章參考文獻
第二章 蛋白質的分子組成、結構及理化性質分析
第一節(jié) 概述
一、蛋白質分子的基本概念
二、蛋白質的分離和純化
三、蛋白質的定量
四、蛋白質純度的鑒定
五、蛋白質分子的序列分析
第二節(jié) 實驗項目
實驗一蛋白質的定量測定
Ⅰ.Kjeldahl定氮法
Ⅱ．Lowry酚試劑法
Ⅲ．紫外光譜吸收法
Ⅳ．考馬斯亮藍染色法
實驗二生物體液和組織蛋白質的分離和鑒定
Ⅰ.血清IgG的分離純化（離子交換層析法）
Ⅱ．細胞色素c的制備及鑒定
實驗三血清蛋白質的電泳分離
Ⅰ.醋酸纖維薄膜電泳
Ⅱ．聚丙烯酰胺凝膠盤狀電泳
實驗四蛋白質理化性質分析
Ⅰ.等電聚焦電泳法測定蛋白質等電點
Ⅱ．SDS-PAGE測定蛋白質相對分子質量
實驗五蛋白質的分子篩層析分離及相對分子質量測定
Ⅰ.血紅蛋白、DNP-魚精蛋白混合物的分離（分子篩層析法）
Ⅱ．分子篩層析測定蛋白質相對分子質量
實驗六蛋白質分子組成及末端氨基酸分析
Ⅰ.DNS法分析蛋白質氨基酸組分
Ⅱ．蛋白質及多肽的N-末端氨基酸分析（FDNB法）
Ⅲ．蛋白質及多肽的C-末端氨基酸分析（羧肽酶法）
實驗七肽的N-末端測定及其順序分析（DABITC／PITC雙偶合法）
實驗八固定化蛋白質的免疫生化鑒定（Western印跡）
本章參考文獻
第三章 核酸的分子組成及理化性質分析
第一節(jié) 概述
一、核酸的分子組成與結構
二、核酸的理化性質
三、核酸的制備和含量測定
第二節(jié) 實驗項目
實驗九動物肝臟RNA的制備（苯酚法）
實驗十小牛胸腺DNA的制備（濃鹽法）
實驗十一核酸的含量測定
Ⅰ.紫外吸收法測定核酸含量
Ⅱ．定磷法測定核酸含量
Ⅲ．地衣酚法測定RNA含量
Ⅳ．二苯胺顯色法測定DNA含量
實驗十二電泳法分離RNA和DNA
Ⅰ.瓊脂糖凝膠電泳分離DNA
Ⅱ．聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）分離RNA
實驗十三DNA堿基成分分析及含量測定
本章參考文獻
第四章 酶作用及酶反應動力學分析
第一節(jié) 概述
一、酶反應動力學分析
二、酶的抑制作用動力學
三、影響酶反應速率的其他因素
四、酶試驗
第二節(jié) 實驗項目
實驗十四蔗糖酶與淀粉酶作用的專一性
實驗十五胰蛋白酶的親和層析法純化
實驗十六酸性磷酸酶KM及Vmax值測定
附一、O．1N碘溶液的配制及標定
二、0．1N硫代硫酸鈉溶液的配制及標定
實驗十七磷酸鹽及氟化鈉對酸性磷酸酶的抑制作用
實驗十八乳酸脫氫酶同工酶分析
本章參考文獻
第五章 物質代謝及其激素調節(jié)
第一節(jié) 概述
一、物質代謝定義
二、研究目的、材料
三、研究方法
四、實驗安排
第二節(jié) 實驗項目
實驗十九胰島素及腎上腺素對血糖濃度的影響
附Nelson-Somogyi法測定血糖濃度
實驗二十飽食、饑餓及激素對肝糖元含量的影響
實驗二十一三羧酸循環(huán)中間產物對酵母耗氧率的影響（Warburg氏呼吸儀示教）
附Warburg氏呼吸儀的構造和使用
實驗二十二脂類的薄層層析
實驗二十三酮體的生成與利用
實驗二十四血清低密度脂蛋白與極低密度脂蛋白的比濁測定
附標準曲線的制作
實驗二十五血清脂蛋白的醋酸纖維薄膜電泳
實驗二十六轉氨基作用
實驗二十七血清谷丙轉氨酶活性的測定（賴氏法）
實驗二十八生物氧化與電子傳遞
本章參考文獻
第六章 分子生物學基本實驗技術
第一節(jié) 概述
一、核酸是遺傳物質
二、基因與基因組
三、DNA復制、損傷與修復
四、基因表達和遺傳密碼
五、基因表達的調控
六、分子生物學實驗技術相關知識
第二節(jié) 實驗項目
實驗二十九質粒DNA的提取
實驗三十質粒DNA酶切及瓊脂糖凝膠電泳分離鑒定
實驗三十一質粒DNA的分子雜交
實驗三十二mRNA的提取與純化
實驗三十三血液標本中DNA的提取
實驗三十四脈沖電場凝膠電泳
實驗三十五RNA分析--Northern雜交
實驗三十六聚合酶鏈反應（PCR）技術體外擴增DNA
實驗三十七反轉錄聚合酶鏈反應（RTI_PCR）
實驗三十八cDNA文庫的構建
實驗三十九PCR-RFLP法測定CYP2C19ml等位基因
實驗四十等位基因特異擴增法分析基因中單堿基突變
實驗四十一利用PCR差異顯示mRNA
本章參考文獻
附錄
一、硫酸銨飽和度計算表
二、緩沖溶液的配制
三、常見蛋白質相對分子質量參考值
四、常見蛋白質等電點參考值
五、實驗誤差
六、實驗報告
七、實驗注意事項及應急處理